UHPLC(超高效液相色譜)是一種高效的色譜分析技術(shù),常用于藥物、化學(xué)、生物等領(lǐng)域的分析和質(zhì)量控制。UHPLC色譜柱是UHPLC技術(shù)的核心組成部分,其性能直接影響到色譜分析的效率和準(zhǔn)確性。粒徑一般在1.7-2.5μm之間,比傳統(tǒng)的HPLC色譜柱小很多,這意味著在相同的柱長(zhǎng)度和流速下,能提供更高的分離效率和靈敏度。此外,效率高也意味著可以使用更短的柱長(zhǎng)度來(lái)完成同樣的分離,從而縮短分析時(shí)間和降低成本。
UHPLC色譜柱需要在高壓力下工作,因此需要具備很高的耐壓性。一般來(lái)說(shuō),UHPLC色譜柱的承受壓力可以達(dá)到10000 psi(約690 bar),比傳統(tǒng)的HPLC色譜柱高出很多。高耐壓性使UHPLC色譜柱在高流速下工作時(shí)更加穩(wěn)定可靠,并能處理更為復(fù)雜的樣品。分離效果很好,能夠有效地分離復(fù)雜的混合物,從而提高分析的精度和準(zhǔn)確性。UHPLC色譜柱的分離能力主要依賴于其表面性質(zhì)。一般來(lái)說(shuō),使用親水性或疏水性色譜柱可以對(duì)不同類型的化合物進(jìn)行有效的分離。
以下是選購(gòu)UHPLC色譜柱時(shí)需要注意的幾個(gè)方面:
目標(biāo)化合物:首先需要確定所要檢測(cè)的化合物的類型、分子量、極性和穩(wěn)定性,并根據(jù)這些信息來(lái)挑選色譜柱。根據(jù)化合物的性質(zhì)選擇合適的色譜填料類型、孔徑大小、抗污染性等參數(shù),以確保樣品可以得到分離結(jié)果。
色譜柱長(zhǎng)度:牢記短柱更適合快速分離,其中長(zhǎng)柱則更適合提取完整的化合物混合物。在大多數(shù)情況下,色譜柱長(zhǎng)度為50毫米時(shí)便能同時(shí)滿足高效分離和容易維護(hù)的條件。
列直徑:該指標(biāo)在UHPLC色譜柱中非常重要,直徑越小列才能走得越快,且填料間越接近,這樣就可以使各種化學(xué)物質(zhì)留在柱內(nèi)的時(shí)間更短,從而提高空穴率。選擇列管內(nèi)徑時(shí)需根據(jù)所要檢測(cè)樣品類型的不同來(lái)進(jìn)行選擇。
色譜柱的類型:針對(duì)分析方法的不同,選擇不同類型的色譜柱。例如,對(duì)于氨基酸蛋白質(zhì)層析,可選擇有機(jī)硅柱或堿性物質(zhì)柱,對(duì)于肽類氧化或N-甲化,選用親水性畫紙或Polar派系固定相柱等,以達(dá)到分離結(jié)果。